抗生素對大家來說并不陌生。抗生素作為一種消炎藥，廣泛應用于各種疾病的治療中，但濫用其危害也是顯而易見的；近年來，除了歐美國家在地表水中發現抗生素超標外，我國一些科研人員在長江的抽樣檢測中也發現了抗生素含量高的現象。這些抗生素大多由醫療廢水、生活污水、水產養殖廢水、動物用藥、飼料等排放到地表水中，然后部分通過飲用水進入人體。這也是近年來出臺多項水中抗生素檢測標準的原因。

今天就來說說液相色譜-三重四極桿質譜檢測水中抗生素的方法。該方法的檢測原理是將收集到的水質樣品經0.22pm濾膜過濾，與乙腈1:1混合，用液相色譜-三重四級桿質譜儀測定。根據保留時間和特征離子定性，外標法定量。

一、檢測所用試劑：

1.乙腈：色譜純。

2.甲酸：色譜純。

4.50%乙腈溶液：取50ml乙腈，用水稀釋至100ml。

5.0.1%甲酸水溶液：取lml甲酸，用水稀釋至1000ml。

6.標準品：紅霉素，含量≥97.0%；青霉素，含量≥98.0%。

7.紅霉素標準儲備液濃度為100ug/ml。準確稱10.0mg紅霉素標準產品，用乙腈溶解稀釋成濃度為100ug/ml的標準儲備液；也可以直接購買有證標準溶液，在-10℃以下冷凍，避光保存；或者參照廠家的產品說明書保存，使用時應恢復室溫，搖勻。

8.青霉素標準儲備液濃度為100ug/ml。準確稱10.0mg青霉素標準產品，用50%乙腈溶液溶解稀釋成濃度為100ug/ml的標準儲備液；也可以直接購買有證標準溶液，在-10℃以下冷凍，避光保存；或者參照廠家的產品說明書保存，使用時應恢復室溫，搖勻。

9.紅霉素和青霉素混合標準使用液:濃度為10.0ug/ml。紅霉素和青霉素標準儲備液分別在10.0ml容量瓶中取1.00ml，用50%乙腈溶液定容，可獲得紅霉素和青霉素混合標準使用液。

10.濾膜：一次性針式過濾器，0.22um，混合纖維素酯(MCE)材料。

11.一次性聚丙烯針管。

二、檢測所用儀器：

1.液相色譜-三重四級桿質譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)，具有梯度洗脫和多反應監測功能。

2.分析天平：感量為0.0001g。

3.樣品瓶：100毫升磨口或帶聚四氟乙烯內襯瓶蓋的棕色玻璃瓶。

4.微量注射器或移液器：10ul、50ul、100ul、500ul、1.0ml。

三、采集和制備水樣:

我們可以按照有關規定收集水質樣品。采集水樣時，應充滿樣品瓶，無縫隙。冷藏在4℃以下，避光保存。2d內完成分析。

四、水樣的制備:

水樣應充分混合，取約10ml樣品，用0.22um濾膜過濾。放棄至少1ml的初始濾液后，準確將500ul過濾后的樣品從棕色進樣瓶中取出，然后加入500ul乙腈，待測試。

制備空白水樣。用實驗室一級純水代替水樣，然后按照水樣制備步驟操作空白水樣。

五、檢測步驟：

1.液相色譜條件：

色譜柱為C18(100mmX2.1mm，粒徑1.7um)，或相等；流動相為A:乙腈，B:0.1%甲酸水溶液；流速為0.25ml/min；柱溫為30℃；進樣體積為10ul；流動相梯度洗脫程序

2.質譜條件：

離子源為電噴霧離子源(ESI)；掃描方法為正離子模式；監測方法為多反應監測(MRM)；去溶劑氣、錐孔氣、碰撞氣均為高純氮氣或其他合適氣體。

3.建立標準曲線：

取適量紅霉素和青霉素混合標準用液，用50%乙腈溶液稀釋，制備至少5個濃度點的標準系列溶液。標準溶液中紅霉素和青霉素的參考濃度分別為0.100ug/L、0.200ug/L、0.500ug/L、1.00ug/L、2.00ug/L、5.00ug/L、10.0ug/L和20.0ug/L。根據規定的儀器條件，從低濃度到高濃度依次測量標準系列溶液。以目標化合物的質量濃(ug/L)為橫坐標，以相應的響應值為縱坐標，建立標準曲線。

六、水樣的測定：

按規定的儀器條件測量準備好的水樣。定性分析可以在相同的色譜/質譜條件下測量標準溶液和樣品。根據標準溶液色譜圖的保留時間和樣品的保留時間，標準溶液各色譜峰的特征離子與樣品各色譜峰的特征離子相對定性。樣品與標準物質保留時間的相對偏差不大于5%。樣品中目標化合物定性子離子的相對豐度(Ksam)。與濃度相近的標準溶液中相應定性離子的相對豐度(Kskd)相比，相對豐度偏差不超過相關圖表規定的范圍，可以判斷樣品中存在相應的目標化合物。水樣中紅霉素、青霉素的質量濃度可直接按公式計算。