抗生素對(duì)大家來(lái)說(shuō)并不陌生。抗生素作為一種消炎藥，廣泛應(yīng)用于各種疾病的治療中，但濫用其危害也是顯而易見(jiàn)的；近年來(lái)，除了歐美國(guó)家在地表水中發(fā)現(xiàn)抗生素超標(biāo)外，我國(guó)一些科研人員在長(zhǎng)江的抽樣檢測(cè)中也發(fā)現(xiàn)了抗生素含量高的現(xiàn)象。這些抗生素大多由醫(yī)療廢水、生活污水、水產(chǎn)養(yǎng)殖廢水、動(dòng)物用藥、飼料等排放到地表水中，然后部分通過(guò)飲用水進(jìn)入人體。這也是近年來(lái)出臺(tái)多項(xiàng)水中抗生素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的原因。

今天就來(lái)說(shuō)說(shuō)液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜檢測(cè)水中抗生素的方法。該方法的檢測(cè)原理是將收集到的水質(zhì)樣品經(jīng)0.22pm濾膜過(guò)濾，與乙腈1:1混合，用液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀測(cè)定。根據(jù)保留時(shí)間和特征離子定性，外標(biāo)法定量。

一、檢測(cè)所用試劑：

1.乙腈：色譜純。

2.甲酸：色譜純。

4.50%乙腈溶液：取50ml乙腈，用水稀釋至100ml。

5.0.1%甲酸水溶液：取lml甲酸，用水稀釋至1000ml。

6.標(biāo)準(zhǔn)品：紅霉素，含量≥97.0%；青霉素，含量≥98.0%。

7.紅霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為100ug/ml。準(zhǔn)確稱10.0mg紅霉素標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品，用乙腈溶解稀釋成濃度為100ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；也可以直接購(gòu)買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，在-10℃以下冷凍，避光保存；或者參照廠家的產(chǎn)品說(shuō)明書保存，使用時(shí)應(yīng)恢復(fù)室溫，搖勻。

8.青霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為100ug/ml。準(zhǔn)確稱10.0mg青霉素標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品，用50%乙腈溶液溶解稀釋成濃度為100ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；也可以直接購(gòu)買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，在-10℃以下冷凍，避光保存；或者參照廠家的產(chǎn)品說(shuō)明書保存，使用時(shí)應(yīng)恢復(fù)室溫，搖勻。

9.紅霉素和青霉素混合標(biāo)準(zhǔn)使用液:濃度為10.0ug/ml。紅霉素和青霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液分別在10.0ml容量瓶中取1.00ml，用50%乙腈溶液定容，可獲得紅霉素和青霉素混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

10.濾膜：一次性針式過(guò)濾器，0.22um，混合纖維素酯(MCE)材料。

11.一次性聚丙烯針管。

二、檢測(cè)所用儀器：

1.液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)，具有梯度洗脫和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)功能。

2.分析天平：感量為0.0001g。

3.樣品瓶：100毫升磨口或帶聚四氟乙烯內(nèi)襯瓶蓋的棕色玻璃瓶。

4.微量注射器或移液器：10ul、50ul、100ul、500ul、1.0ml。

三、采集和制備水樣:

我們可以按照有關(guān)規(guī)定收集水質(zhì)樣品。采集水樣時(shí)，應(yīng)充滿樣品瓶，無(wú)縫隙。冷藏在4℃以下，避光保存。2d內(nèi)完成分析。

四、水樣的制備:

水樣應(yīng)充分混合，取約10ml樣品，用0.22um濾膜過(guò)濾。放棄至少1ml的初始濾液后，準(zhǔn)確將500ul過(guò)濾后的樣品從棕色進(jìn)樣瓶中取出，然后加入500ul乙腈，待測(cè)試。

制備空白水樣。用實(shí)驗(yàn)室一級(jí)純水代替水樣，然后按照水樣制備步驟操作空白水樣。

五、檢測(cè)步驟：

1.液相色譜條件：

色譜柱為C18(100mmX2.1mm，粒徑1.7um)，或相等；流動(dòng)相為A:乙腈，B:0.1%甲酸水溶液；流速為0.25ml/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣體積為10ul；流動(dòng)相梯度洗脫程序

2.質(zhì)譜條件：

離子源為電噴霧離子源(ESI)；掃描方法為正離子模式；監(jiān)測(cè)方法為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；去溶劑氣、錐孔氣、碰撞氣均為高純氮?dú)饣蚱渌线m氣體。

3.建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：

取適量紅霉素和青霉素混合標(biāo)準(zhǔn)用液，用50%乙腈溶液稀釋，制備至少5個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。標(biāo)準(zhǔn)溶液中紅霉素和青霉素的參考濃度分別為0.100ug/L、0.200ug/L、0.500ug/L、1.00ug/L、2.00ug/L、5.00ug/L、10.0ug/L和20.0ug/L。根據(jù)規(guī)定的儀器條件，從低濃度到高濃度依次測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。以目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃(ug/L)為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

六、水樣的測(cè)定：

按規(guī)定的儀器條件測(cè)量準(zhǔn)備好的水樣。定性分析可以在相同的色譜/質(zhì)譜條件下測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖的保留時(shí)間和樣品的保留時(shí)間，標(biāo)準(zhǔn)溶液各色譜峰的特征離子與樣品各色譜峰的特征離子相對(duì)定性。樣品與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時(shí)間的相對(duì)偏差不大于5%。樣品中目標(biāo)化合物定性子離子的相對(duì)豐度(Ksam)。與濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)定性離子的相對(duì)豐度(Kskd)相比，相對(duì)豐度偏差不超過(guò)相關(guān)圖表規(guī)定的范圍，可以判斷樣品中存在相應(yīng)的目標(biāo)化合物。水樣中紅霉素、青霉素的質(zhì)量濃度可直接按公式計(jì)算。